lncRNA，miRNA和mRNA關(guān)聯(lián)分析

　　1實(shí)驗介紹人類(lèi)基因組測序結果分析表明，全基因組中能夠編碼蛋白質(zhì)的DNA 僅占有很少一部分，絕大部分為不編碼蛋白質(zhì)的DNA，這些DNA轉錄形成的產(chǎn)物即為非編碼RNA。非編碼RNA（包含microRNA和long no-coding RNA）在細胞分化和代謝等生命活動(dòng)中扮演著(zhù)舉足輕重的作用。lncRNA 與miRNA 之間可通過(guò)相互調控來(lái)影響腫瘤的發(fā)生發(fā)展。由于多數lncRNA的結構與mRNA 具有一定的相似性，提示miRNA可能通過(guò)類(lèi)似于mRNA 的作用機制負性調控lncRNA 的表達，進(jìn)而發(fā)揮一系列生物學(xué)作用。lncRNA 通過(guò)與miRNA 競爭結合靶基因mRNA 的3'-UTR，間接抑制miRNA 對靶基因的負向調控；2) 某些lncRNA 通過(guò)細胞內的剪切作用可形成miRNA 的前體，進(jìn)而加工生成特異miRNA，調控靶基因的表達進(jìn)而發(fā)揮功能；3) 個(gè)別lncRNA 可發(fā)揮內源性miRNA 海綿的功能，抑制miRNA的表達。因此，整合分析miRNA-lncRNA-mRNA之間的調控關(guān)系能夠更全面的闡述疾病的發(fā)生和發(fā)展。

 

　　2技術(shù)路線(xiàn)及方法：

　　實(shí)驗驗證

 

　　Real-time PCR驗證差異表達的miRNA, lncRNA和mRNA。

 

　　雙熒光素酶報告基因驗證miRNA與其靶基因的相互作用

 

　　樣本要求:每組樣本不少3個(gè)。

 

　　mRNA測序：RNA樣品總量: ≥1.5 μg；RNA樣品濃度: ≥50 ng/μL

 

　　microRNA測序：RNA樣品總量: ≥3 μg；RNA樣品濃度: ≥200 ng/μL

 

　　lncRNA測序：RNA樣品總量: ≥3 μg；RNA樣品濃度: ≥100 ng/μL