RACE技術(shù)服務(wù)

　　實(shí)驗介紹RACE(rapid-amplification of cDNA ends)是通過(guò)PCR進(jìn)行cDNA末端快速克隆的技術(shù)。本公司可對有polyA尾和5’帽子結構的真核生物mRNA進(jìn)行相應的RACE分析。進(jìn)行RACE實(shí)驗需至少有200bp以上的已知序列。

 

　　3’RACE原理：用帶有特殊接頭的逆轉錄引物對總RNA進(jìn)行逆轉錄，根據逆轉錄引物上的接頭序列和mRNA已知序列設計引物即可擴增出3’末端序列。

 

　　5’RACE原理：將5’末端的帽子結構去掉后，mRNA5’末端即暴露出磷酸基團。用T4 RNA連接酶在mRNA5’末端連接特異性接頭。反轉錄后，根據接頭序列和mRNA已知序列設計引物對反轉錄產(chǎn)物擴增，即可擴增出mRNA5’末端的序列。

 

　　cDNA末端快速擴增技術(shù) (rapid amplification of cDNA ends, RACE)，是運用PCR技術(shù)，在僅知目標基因部分序列片段的基礎上，從轉錄本中快速擴增其cDNA的5’和3’末端的有效方法。主要應用于全長(cháng)基因獲取、轉錄起始位點(diǎn)的位置、轉錄調控區域、miRNA/lncRNA靶標驗證。

 

　　關(guān)鍵因素：RACE實(shí)驗成功的關(guān)鍵在于高質(zhì)量與完整性好的RNA以及特異性強的引物，我們有專(zhuān)業(yè)的技術(shù)員能夠完成以上的任務(wù)。

 

　　交付結果：擴增全長(cháng)片段測序報告；擴增的全長(cháng)片段的電泳圖；含全長(cháng)片段的質(zhì)粒及菌液。

 

　　交付時(shí)間：大約15-25個(gè)工作日

 

　　服務(wù)項目

 

　　服務(wù)流程3‘RACE實(shí)驗

 

　　根據已知序列設計帶接頭的逆轉錄引物及巢式PCR引物

 

　　高質(zhì)量RNA提取

 

　　用帶接頭的逆轉錄對mRNA進(jìn)行逆轉錄

 

　　槽式PCR擴增3’末端序列，并電泳檢測

 

　　將PCR產(chǎn)物送測序公司測序或連接T載體后測序

 

　　5‘RACE實(shí)驗

 

　　根據已知序列設計巢式PCR引物

 

　　高質(zhì)量RNA提取

 

　　去磷酸化處理

 

　　“去帽子”反應

 

　　5’RACE Adaptor的連接

 

　　逆轉錄反應

 

　　巢式PCR擴增5’末端序列

 

　　將PCR產(chǎn)物送測序公司測序或連接T載體后測序

 

　　樣本要求1、需提供新鮮組織或活細胞樣本。如果提供RNA樣本，需要高質(zhì)量無(wú)降解RNA片段。

 

　　2、組織或RNA樣本需干冰或液氮運輸。細胞樣本常溫運輸。

 

　　3、需提供至少200bp已知序列，且已知序列需與mRNA序列一致，不能是與mRNA互補序列，否則RACE實(shí)驗可能無(wú)法完成。

 

　　留言咨詢(xún)