甲基化檢測（MSP/BSP/qMSP/HRM）

　　實(shí)驗介紹DNA甲基化在人的正常發(fā)育、X染色體失活、衰老以及許多人類(lèi)疾?。ㄈ绨l(fā)育畸形、癌癥、心血管疾病、糖尿病和神經(jīng)心理失調等）過(guò)程中發(fā)揮重要作用，已經(jīng)成為表觀(guān)遺傳學(xué)和表觀(guān)基因組學(xué)的重要研究?jì)热荨?DNA甲基化是表觀(guān)遺傳修飾的主要方式，它是由DNA甲基轉移酶(DNA methyl-transferase，Dnmt)催化S-腺苷甲硫氨酸作為甲基供體，將胞嘧啶轉變?yōu)?-甲基胞嘧啶（mC）的一種反應，它并不改變DNA的一級結構，卻在細胞的發(fā)育、基因的表達、及基因組的穩定性中起著(zhù)重要的作用。CpG島的高甲基化是腫瘤中存在的普遍現象，而啟動(dòng)子CpG島的高甲基化是除突變和缺失外腫瘤中抑癌基因失活的第三種機制。 因此，基因啟動(dòng)子甲基化檢測在臨床診斷（如甲基化檢測與低劑量CT相結合）、藥物敏感性檢測等方面具有很高的應用價(jià)值。

 

　　服務(wù)項目依據實(shí)驗目的及用途的不同，本公司可做以下幾種服務(wù)：

 

　　1> MSP：甲基化定性分析

 

　　2> qMSP：對于驗證的CpG Island，進(jìn)行穩定的高度定量和靈敏的甲基化檢測分析

 

　　3> BSP：甲基化克隆測序分析，一般挑選10-15個(gè)克隆進(jìn)行測序分析，一般可以提供≥10個(gè)測序結果

 

　　4> HRM：高分辨率溶解曲線(xiàn)進(jìn)行甲基化分析

 

　　交付結果：實(shí)驗報告、返還樣本及產(chǎn)物

 

　　質(zhì)量保證：客觀(guān)、公正、可信數據結果

 

　　交付時(shí)間：大約10-15個(gè)工作日（根據預實(shí)驗、樣本數量情況決定）

 

　　服務(wù)流程1、 依據客戶(hù)提供的基因及下游實(shí)驗，設計合成相應引物

 

　　2、 DNA提取與質(zhì)量分析

 

　　3、 亞硫酸鹽修飾即CT轉換

 

　　4、 預實(shí)驗驗證引物，優(yōu)化PCR條件

 

　　5、 MSP：普通PCR產(chǎn)物電泳

 

　　qMSP：選擇合適的內參及優(yōu)化后的引物，進(jìn)行熒光定量PCR

 

　　BSP：對普通PCR獲得的產(chǎn)物進(jìn)行純化，TA克隆，挑選10-15個(gè)克隆進(jìn)行測序，提供≥10個(gè)測序成功結果

 

　　HRM：選擇優(yōu)化后的引物，進(jìn)行熒光定量PCR

 

　　6、對實(shí)驗結果進(jìn)行分析，撰寫(xiě)詳細實(shí)驗報告，包括引物序列，包括DNA提取方法、DNA電泳圖、普通PCR電泳圖、qPCR擴增曲線(xiàn)、溶解曲線(xiàn)、院士程序、菌液PCR電泳圖、測序原始文件及測序結果分析，以及最終的甲基化程序分析。

 

　　樣本要求可用于提取基因組的實(shí)驗材料，如細胞（≥105個(gè)）、組織（≥50mg）

 

　　實(shí)驗周期：10-15個(gè)工作日（根據預實(shí)驗、樣本數量、基因情況決定）

 

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