Incrna熒光定量PCR檢測

　　實(shí)驗介紹LncRNA即長(cháng)鏈非編碼RNA，它是一類(lèi)轉錄本長(cháng)度超過(guò)200nt的RNA分子，具有類(lèi)似mRNA結構的polyA尾及啟動(dòng)子結構，它在分化過(guò)程中有動(dòng)態(tài)表達與不同的剪接方式，但是這些RNA卻不編碼蛋白質(zhì)，而是以RNA的形式在多種層面上，通過(guò)表觀(guān)遺傳調控、轉錄調控及轉錄后調控等來(lái)調控基因的表達水平。

 

　　交付結果：實(shí)驗報告、樣本返還

 

　　質(zhì)量保證：客觀(guān)、公正、可信數據結果

 

　　交付時(shí)間：大約5-10個(gè)工作日（根據預實(shí)驗、樣本數量情況決定）

 

　　服務(wù)項目：lncRNA RT qPCR檢測、lncRNA qPCR引物引物設計合成

 

　　服務(wù)流程1、 依據客戶(hù)提供的基因ID或基因名稱(chēng)設計合成引物（含驗證）

 

　　2、 標準品制備:只針對于絕對定量，相對定量多種內參可供選擇（如：β-actin，GAPDH或客戶(hù)提供特異性?xún)葏ⅲ?/span>

 

　　3、 RNA提取及RNA質(zhì)量分析：采用Invitrogen的TRIzol 進(jìn)行裂解提取，RNA提取質(zhì)量有瓊脂糖凝膠電泳及分光光度計雙重質(zhì)控

 

　　4、 逆轉錄：嚴格按照f(shuō)ermentas的反轉錄試劑盒要求抽取質(zhì)控合格的RNA，并且可提供oligo(dT)、隨機引物、基因特異性引物以及混合引物幾種模式進(jìn)行反轉錄，以最大程度的確保反轉錄酶的反轉效率

 

　　5、 預實(shí)驗驗證樣品和引物：依據客戶(hù)選定內參及基因，對客戶(hù)全部樣本內參及個(gè)別樣本基因進(jìn)行驗證，以確保樣本的反轉錄情況及基因的設計

 

　　6、 正式實(shí)驗：在以上所有質(zhì)控合格的情況下，每個(gè)樣本每個(gè)基因進(jìn)行四個(gè)復孔的重復檢測，確保至少提供三個(gè)復孔Ct≤0.5的數據

 

　　7、 實(shí)驗報告：提供詳細的實(shí)驗報告，包括RNA提取電泳圖、擴增曲線(xiàn)、溶解曲線(xiàn)及數據結果分析

 

　　樣本要求細胞（≥106個(gè)）：必須是活細胞，貼壁或懸浮均可

 

　　組織（≥50mg）:盡量新鮮并且切取之后立即置于液氮或-80℃保存

 

　　全血（2ml以上）：抗凝管4℃運輸，短期保存，分離后血清亦可

 

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