Co-IP免疫共沉淀

　　實(shí)驗介紹免疫沉淀是純化富集目的蛋白的一種方法?？贵w與蛋白裂解液的蛋白結合后，與蛋白A/G（ProteinA/G）或二抗偶聯(lián)的agaose或Sepharose珠子孵育，通過(guò)離心得到珠子-蛋白A/G或二抗-抗體-目的蛋白復合物，沉淀經(jīng)過(guò)洗滌后，重懸于電泳上樣緩沖液，煮沸5-10min，在高溫及還原劑的作用下，抗原與抗體解離，離心收集上清，上清中包括抗體、目的蛋白和少量的雜蛋白。

 

　　免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation）是以抗體和抗原之間的專(zhuān)一性作用為基礎的用于研究蛋白質(zhì)相互作用的經(jīng)典方法。是確定兩種蛋白質(zhì)在完整細胞內生理性相互作用的有效方法。當細胞在非變性條件下被裂解時(shí)，完整細胞內存在的許多蛋白質(zhì)－蛋白質(zhì)間的相互作用被保留了下來(lái)。當用預先固化在argarose beads上的蛋白質(zhì)A的抗體免疫沉淀A蛋白，那么與A蛋白在體內結合的蛋白質(zhì)B也能一起沉淀下來(lái)。再通過(guò)蛋白變性分離，對B蛋白進(jìn)行檢測，進(jìn)而證明兩者間的相互作用。這種方法得到的目的蛋白是在細胞內與興趣蛋白天然結合的，符合體內實(shí)際情況，得到的結果可信度高。這種方法常用于測定兩種目標蛋白質(zhì)是否在體內結合；也可用于確定一種特定蛋白質(zhì)的新的作用搭檔。

 

　　服務(wù)項目

 

　　服務(wù)流程1、接收樣本以及抗體，具體實(shí)驗方案。

 

　　2、預實(shí)驗確定樣本中蛋白表達以及抗體效價(jià)。

 

　　3、正式實(shí)驗。5-10個(gè)工作日內完成，根據檢測指標難易、蛋白表達豐度不同以及檢測指標數量多少相應變化。

 

　　4、出具實(shí)驗報告，提供原始掃描圖片。

 

　　樣本要求可以接收樣本有：細胞樣本，樣本來(lái)源為人和大小鼠。

 

　　1、客戶(hù)已凍存樣本對實(shí)驗有影響，不建議提供已經(jīng)凍存樣本。

 

　　2、客戶(hù)提供細胞樣本

 

　　1）、細胞狀態(tài)良好， 保證運輸到實(shí)驗室的細胞為活細胞。

 

　　2）、每個(gè)實(shí)驗組細胞數量保證大于107以上，根據檢測指標難易、蛋白表達豐度不同以及檢測指標數量多少細胞要求數量會(huì )相應變化。

 

　　3、其他

 

　　1）、組織樣本蛋白的提取根據具體情況制定方案。

 

　　2）、特殊樣本：血清、細胞培養上清、非實(shí)驗室常規來(lái)源樣本（狗、豬、猴等）等，根據具體情況制定不同實(shí)驗方案。

 

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