蛋白質(zhì)免疫印跡（Western Blot)

　　實(shí)驗介紹蛋白質(zhì)印跡法（免疫印跡試驗）即western blot。它是分子生物學(xué)、生物化學(xué)和免疫遺傳學(xué)中常用的一種實(shí)驗方法。其基本原理是通過(guò)特異性抗體對凝膠電泳處理過(guò)的細胞或生物組織樣品進(jìn)行著(zhù)色。通過(guò)分析著(zhù)色的位置和著(zhù)色深度獲得特定蛋白質(zhì)在所分析的細胞或組織中表達情況的信息。

 

　　Western Blot法采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳，被檢測物是蛋白質(zhì)，“探針”是抗體，“顯色”用標記的二抗。經(jīng)過(guò)聚丙烯酰胺凝膠電泳分離的蛋白質(zhì)樣品，轉移到固相載體（例如硝酸纖維素薄膜）上，固相載體以非共價(jià)鍵形式吸附蛋白質(zhì)，且能保持電泳分離的多肽類(lèi)型及其生物學(xué)活性不變。以固相載體上的蛋白質(zhì)或多肽作為抗原，與對應的抗體起免疫反應，再與酶的第二抗體起反應，經(jīng)過(guò)底物顯色以檢測電泳分離的特異性目的基因表達的蛋白成分。該技術(shù)也廣泛應用于檢測蛋白水平的表達。

 

　　實(shí)驗的關(guān)鍵是如何正確的抽提獲得實(shí)驗所需目的蛋白，我們會(huì )根據不同目的蛋白、組織類(lèi)型、蛋白類(lèi)型制定出抽提方案來(lái)獲得高質(zhì)量、含量足夠的目的蛋白的蛋白裂解液。

 

　　免疫印跡(immunoblotting)又稱(chēng)蛋白質(zhì)印跡(western blot)，它是根據抗原抗體的特異性結合檢測樣品中蛋白的方法,并能對蛋白進(jìn)行定性和半定量分析。

 

　　質(zhì)量控制：制定蛋白質(zhì)抽提方案、嚴格的預實(shí)驗摸索優(yōu)化實(shí)驗條件，確保實(shí)驗的可靠性。

 

　　交付結果：數據分析、實(shí)驗報告、原始數據及圖片、剩余樣本等

 

　　質(zhì)量保證：客觀(guān)、公正、可信的實(shí)驗結果

 

　　交付時(shí)間：大約10-15個(gè)工作日（根據預實(shí)驗、樣本數量情況決定）

 

　　服務(wù)項目：總蛋白/細胞膜/漿/核/特定細胞器蛋白抽提、蛋白定量、Western Blot檢測

 

　　服務(wù)流程1、接收樣本以及抗體，實(shí)驗室可以有償提供常備抗體。

 

　　2、根據樣本類(lèi)型、目的蛋白表達確定蛋白抽提方案，預實(shí)驗確定樣本中蛋白表達以及抗體效價(jià)。

 

　　3、正式實(shí)驗。

 

　　4、5-10個(gè)工作日內完成，根據檢測指標難易、蛋白表達豐度不同以及檢測指標數量多少相應變化。

 

　　5、出具實(shí)驗報告（詳細實(shí)驗流程以及數據分析），提供原始掃描圖片。

 

　　樣本要求可以接收樣本有：客戶(hù)自己提取蛋白樣本、細胞樣本、組織樣本、其他，樣本來(lái)源為人和大小鼠。

 

　　1、客戶(hù)提供已經(jīng)提取樣本

 

　　1）、蛋白保存完好：蛋白提取后保存于-80℃或者液氮。

 

　　2）、提取過(guò)程中加入合適蛋白酶抑制劑。

 

　　3）、蛋白采用BCA法測濃度后，濃度范圍應該為2-8ug/ul或者更高。

 

　　4）、經(jīng)預實(shí)驗檢測合格后才可進(jìn)行正式實(shí)驗。

 

　　2、客戶(hù)提供細胞樣本

 

　　1）、細胞狀態(tài)良好， 保證運輸到實(shí)驗室的細胞為活細胞。

 

　　2）、每個(gè)實(shí)驗組細胞數量保證大于106以上，根據檢測指標難易、蛋白表達豐度不同以及檢測指標數量多少細胞要求數量會(huì )相應變化。

 

　　3、客戶(hù)提供組織樣本

 

　　1）、組織保存完好：保存于-80℃或者液氮。

 

　　2）、組織重量要求大于100mg，根據組織大小、檢測指標難易、蛋白表達豐度不同以及檢測指標數量多少組織要求數量會(huì )相應變化。

 

　　3）、組織中血液殘留少，應該剔除除目的組織以外的部分。

 

　　4、其他

 

　　1）、對于需要分離細胞組分蛋白，根據情況制定不同提取方案。

 

　　2）、特殊樣本：血清、細胞培養上清、非實(shí)驗室常規來(lái)源樣本（狗、豬、猴等）等，根據具體情況制定不同實(shí)驗方案。

 

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