RNAi干擾靶標驗證實(shí)驗（shRNA）

　　實(shí)驗介紹shRNA是short hairpin RNA 的縮寫(xiě)，包括兩個(gè)短反向重復序列。將shRNA序列構建進(jìn)shRNA干擾載體中，并將構建好的質(zhì)粒轉染進(jìn)細胞中，經(jīng)RNA聚合酶合成相應的shRNA。shRNA經(jīng)Dicer酶消化后形成雙鏈siRNA，siRNA在細胞內RNA解旋酶的作用下解鏈成正義鏈和反義鏈，繼之由反義siRNA再與體內一些酶結合形成RNA誘導的沉默復合物（RNA-induced silencing complex，RISC)。RISC與mRNA的同源區進(jìn)行特異性結合，RISC具有核酸酶的功能，在結合部位切割mRNA，切割位點(diǎn)即是與siRNA中反義鏈互補結合的兩端。被切割后的斷裂mRNA隨即降解，從而誘發(fā)宿主細胞針對這些mRNA的降解反應。

 

　　服務(wù)項目

 

　　服務(wù)流程1、目的細胞待沉默基因表達量檢測

 

　　2、干擾序列設計

 

　　3、根據序列構建三個(gè)shRNA干擾質(zhì)粒，并做無(wú)內毒素質(zhì)粒中提

 

　　4、如果在非工具細胞中檢測，則需要進(jìn)行轉染預實(shí)驗

 

　　5、shRNA轉染

 

　　6、24小時(shí)后，qPCR檢測目的基因表達情況，篩選合適的shRNA干擾質(zhì)粒

 

　　最終提供 詳細實(shí)驗報告、shRNA干擾載體測序結果、質(zhì)粒、甘油菌

 

　　樣本要求待沉默的目的基因需在NCBI上能查到該物種所有轉錄組信息，否則無(wú)法驗證設計的siRNA是否會(huì )沉默其它基因。

 

　　如果需要在特定細胞中進(jìn)行實(shí)驗，客戶(hù)提供生長(cháng)狀況良好的細胞株，同時(shí)提供細胞特性，培養條件及相關(guān)注意事項。

 

　　本公司常備DMEM(H)和RPMI-1640培養基，如細胞需要用其它培養基，則需要客戶(hù)提供培養基。

 

　　需保證目的基因在該細胞中高表達，否則無(wú)法進(jìn)行siRNA篩選驗證實(shí)驗。

 

　　留言咨詢(xún)