雙熒光素酶報告基因檢測

　　實(shí)驗介紹 熒光素酶報告基因系統是以熒光素為底物來(lái)檢測螢火蟲(chóng)熒光素酶活性的一種報告系統。熒光素酶可以催化熒光素氧化成氧合蟲(chóng)熒光素，在熒光素氧化的過(guò)程中，會(huì )發(fā)出生物熒光。然后可以通過(guò)熒光測定儀也稱(chēng)化學(xué)發(fā)光儀或液閃測定儀測定熒光素氧化過(guò)程中釋放的生物熒光。通過(guò)熒光強度可以反映出熒光素酶基因的表達強弱。

 

　　    通過(guò)使用不同的載體，本實(shí)驗可以用來(lái)進(jìn)行啟動(dòng)子分析、反式作用因子相關(guān)實(shí)驗，也可以用來(lái)測定micRNA對目的基因的調控作用。

 

　　    啟動(dòng)子或反式作用因子相關(guān)實(shí)驗可以用連接目的序列的pGL3與pRL-TK共轉染來(lái)實(shí)現；micRNA對目的基因的調控作用可以用micRNA與連接相應序列的psiCheck2質(zhì)粒共轉染來(lái)實(shí)現。

 

　　服務(wù)項目

 

　　服務(wù)流程1、啟動(dòng)子相關(guān)實(shí)驗流程

 

　　確定實(shí)驗分組，并根據實(shí)驗目的選擇工具細胞或者是目的細胞

 

　　如果選取目的細胞，則用熒光質(zhì)粒進(jìn)行轉染預實(shí)驗，確定最適轉染條件

 

　　將pGL3與pRL-TK按不同比例共轉染，并進(jìn)行熒光素酶報告基因檢測，確定兩種質(zhì)粒的最適比例

 

　　按照設計的實(shí)驗分組和摸索的最適載體比例進(jìn)行正式轉染實(shí)驗

 

　　(可選)培養24h后按照實(shí)驗方案加入相應的反式作用因子刺激

 

　　繼續培養24h后，進(jìn)行雙熒光素酶報告基因檢測。

 

　　結果處理，最終提供詳細實(shí)驗報告。

 

　　2、micRNA對目的基因調控研究實(shí)驗流程

 

　　確定實(shí)驗分組

 

　　根據實(shí)驗分組用工具細胞進(jìn)行micRNA與構建的psiCheck2質(zhì)粒共轉染

 

　　培養24小時(shí)后，進(jìn)行雙熒光素酶報告基因檢測

 

　　結果處理，最終提供詳細的實(shí)驗報告。

 

　　樣本要求1、客戶(hù)需提供詳細的實(shí)驗背景資料。包括實(shí)驗目的，實(shí)驗分組等。

 

　　2、客戶(hù)需提供實(shí)驗所需的所有質(zhì)?；騧icRNA mimics。質(zhì)粒濃度需大于400ng/uL，總量大于25uL，且無(wú)內毒素，提供的質(zhì)粒需要有近期的測序報告。如沒(méi)有測序報告，則需另外提供20uL質(zhì)粒供測序驗證；micRNA mimics濃度為20uM，總量大于25uL。

 

　　3、如果客戶(hù)需要在指定細胞中進(jìn)行實(shí)驗，則需要提供相應細胞，細胞需生長(cháng)狀況良好，同時(shí)提供細胞特性，培養條件及相關(guān)注意事項。

 

　　4、本公司常備DMEM/F-12 1:1、DMEM(H)和RPMI-1640培養基，如細胞需要用其它培養基，則需要客戶(hù)提供培養基。

 

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